Clefedro (4-CMC)

Description

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El clephedron (conocido científicamente como 4-clorometcatinona o 4-CMC) es un estimulante sintético perteneciente a la clase de las catinonas. Apareció por primera vez en los mercados ilícitos europeos como alternativa a la mefedrona (4-MMC) y actúa sobre el sistema nervioso central aumentando los niveles de dopamina, noradrenalina y serotonina. Compre cristales de clephedron (4-CMC) de máxima potencia en línea; haga su pedido en Farmacia Novedosa, una farmacia en línea de confianza.Clefedro (4-CMC).

A medida que las nuevas sustancias psicoactivas (NSP) inundan los mercados ilícitos, los departamentos de policía, así como los laboratorios de análisis e investigación especializados en análisis forense y toxicología clínica, se enfrentan al reto de mantenerse al día. Tienda online segura de cristales de Clephedron (4-CMC), la mejor farmacia para comprar cristales de Clephedron (4-CMC) en España

Esto supone una presión para el personal analítico responsable del desarrollo de métodos que permitan la detección fiable (selectiva) y la cuantificación precisa no solo de la NPS específica, sino también de sus metabolitos de fase 1 y, si es posible, de fase 2. Tienda online de cristales de Clephedron (4-CMC) en España, compre cristales de Clephedron (4-CMC) sin receta en España

Este proceso presenta numerosos desafíos que deben identificarse y abordarse claramente para garantizar la calidad y fiabilidad de las estrategias y los métodos analíticos utilizados para la detección de NPS en materiales incautados y en matrices biológicas. Este es un requisito fundamental para evitar resultados analíticos falsos positivos y/o falsos negativos, dadas sus implicaciones legales y terapéuticas.

La 1-(4-clorofenil)-2-(metilamino)-1-propanona (4-clorometcatinona, 4-CMC, para-clorometcatinona) se conoce en el mercado ilícito de drogas con el nombre de clefedrona. Esta droga, perteneciente a la familia de las catinonas y considerada una nueva sustancia psicoactiva (NPS), se identificó por primera vez en el mercado europeo en junio de 2014 [1]. Dónde comprar cristales de clefedrona (4-CMC) en línea en Europa: farmacias en línea (Farmacia Novedosa) en Europa.

Desde entonces, la 4-CMC es una de las drogas de abuso más persistentes en Europa, encontrada regularmente en laboratorios clandestinos, en materiales incautados y en muestras biológicas de consumidores, a pesar de que actualmente está clasificada como sustancia controlada en muchos países. El uso de 4-CMC está causando diversos problemas de salud y accidentes, e incluso la muerte en caso de sobredosis. Compre cristales de Clephedron (4-CMC) en línea para investigación química, solicite cristales de Clephedron (4-CMC) en línea, solicite estimulantes sintéticos en línea para fines de investigación.

En marzo de 2020, la Comisión de Estupefacientes de las Naciones Unidas decidió incluir el 4-CMC en la Lista II del Convenio sobre Sustancias Psicotrópicas de 1971 [1], [2], [3]. Existen pocos métodos analíticos disponibles para la determinación cuantitativa de 4-CMC en materiales incautados [4] y biológicos. Compre cristales de Clephedron (4-CMC) en línea para investigación química, solicite cristales de Clephedron (4-CMC) en línea, solicite estimulantes sintéticos en línea para fines de investigación.

En 2014, Schmid y colaboradores utilizaron espectroscopia de RMN para confirmar la identidad química del 4-CMC adquirido en línea, así como electroforesis capilar y cromatografía de gases-espectrometría de masas indirecta (GC-MS) para confirmar la presencia del compuesto quiral 4-CMC en el material adquirido en forma racémica.

Estructura del 4-CMC y sus principales metabolitos de fase 1.

Sobre esta base, los objetivos del presente estudio fueron el desarrollo de un método basado en cromatografía líquida de alta resolución acoplada a espectrometría de masas en tándem (HPLC-MS/MS) para la determinación enantioselectiva de 4-CMC y sus metabolitos de fase 1, y su aplicación a muestras de fluido oral y orina humanas, como parte de un estudio clínico controlado.

Además, dada la complejidad del contexto del presente estudio, se destacarán algunos aspectos específicos, como los resultados obtenidos en términos de rendimiento del método analítico, así como otros temas de interés general en este campo, no específicamente relacionados con el 4-CMC. Farmacia Novedosa: la mejor farmacia en línea para comprar cristales de Clephedron (4-CMC). Compre cristales de Clephedron (4-CMC) en línea sin receta.

Parte experimental

Reactivos y estándares:

Los estándares de clefedrona y N-etilpentedrona se obtuvieron de Cayman Chemical (Ann Arbor, MI, EE. UU.). Los estándares se almacenaron a −20 °C hasta su análisis. El agua, el metanol, el acetonitrilo, así como el ácido fórmico, el cloroformo, el hidróxido de amonio (solución acuosa al 25 % p/p), el ácido clorhídrico (solución acuosa al 37 % p/p), el formiato de amonio, el acetato de amonio y el acetato de etilo de grado LC-MS se obtuvieron de Carl Roth GmbH (Karlsruhe, Alemania).

Los hepatocitos se obtuvieron de Lonza (Basilea, Suiza), mientras que el HEPES, el medio Williams E, la β-glucuronidasa, el acetato de amonio y el ácido acético de grado LC se obtuvieron de Sigma Aldrich (Milán, Italia). Cristales de Clephedron (4-CMC) asequibles en línea en Europa. Compre cristales de Clephedron (4-CMC) en línea en España.

Columnas quirales: Se evaluó la selectividad de nueve columnas quirales basadas en polisacáridos de la serie Lux, fabricadas por Phenomenex Inc. (Torrance, CA, EE. UU.). Estas columnas se basan en los siguientes selectores quirales: celulosa tris(3,5-dimetilfenilcarbamato) (Lux Cellulose-1), celulosa tris(3-cloro-4-metilfenilcarbamato) (Lux Cellulose-2), celulosa tris(4-metilbenzoato) (Lux Cellulose-3), celulosa tris(4-cloro-3-metilfenilcarbamato) (Lux Cellulose-4), celulosa tris(3,5-diclorofenilcarbamato) (Lux i-Cellulose-5), amilosa tris(3,5-dimetilfenilcarbamato) (Lux Amylose-1 y Lux i-Amylose-1), amilosa tris(5-cloro-2-metilfenilcarbamato) (Lux Amylose-2), amilosa tris(3-cloro-5-metilfenilcarbamato) (Lux i-Amylose-3) y la columna especializada con un selector quiral patentado Lux AMP.

Además, se probó una columna experimental basada en tris(3-cloro-5-metilfenilcarbamato) de celulosa inmovilizada en sílice, fabricada en nuestro laboratorio. Cristales de Clephedron (4-CMC) asequibles en línea en Europa. Compre cristales de Clephedron (4-CMC) en línea en España. Todas las columnas tenían dimensiones de 250 × 4,6 mm y estaban rellenas con partículas de 5 μm.

Identificación de metabolitos de 4-CMC:

Los metabolitos de 4-CMC se identificaron en hepatocitos humanos agrupados de 10 donantes siguiendo nuestro protocolo interno [16], [17]. Brevemente, se incubaron 250 µL de un estándar de 4-CMC de 10 µmol/L con 10⁶ hepatocitos/ml en HEPES 20 mmol/L en medio Williams E a 37 °C durante 3 h. Las reacciones metabólicas se detuvieron con acetonitrilo helado.

Tras la precipitación de proteínas, la evaporación del sobrenadante y la reconstitución en fases móviles de HPLC, los incubados se analizaron mediante cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem de alta resolución (HPLC-HRMS/MS), utilizando un sistema compuesto por cromatografía líquida (UltiMate 3000, Dionex) y un espectrómetro de masas de alta resolución (Q Exactive, Thermo Scientific, Waltham, MA, EE. UU.). El sistema se evaluó mediante una columna Kinetex Biphenyl (150 × 2,1 mm, 2,6 µm) de Phenomenex a 37 °C en modo de elución por gradiente con una fase móvil compuesta por agua y acetonitrilo con un 0,1 % de ácido fórmico.

Se realizó minería de datos brutos asistida por software con Compound Discoverer (Thermo Scientific) utilizando un flujo de trabajo dual para análisis dirigidos y no dirigidos.

Las muestras de orina positivas para 4-CMC, recolectadas en diferentes momentos después de la administración a sujetos humanos, se analizaron siguiendo el mismo protocolo de HPLC-HRMS/MS y minería de datos tras la precipitación de proteínas, la evaporación del sobrenadante y la reconstitución en 100 µL de ácido fórmico al 0,1 % en agua:ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo 90:10 (v/v). Las muestras se prepararon previamente con o sin incubación con β-glucuronidasa de lapas a 37 °C y pH 5,0 durante 3 horas.

Análisis mediante cromatografía líquida de alta resolución acoplada a espectrometría de masas en tándem (HPLC-MS/MS): Las separaciones cromatográficas se realizaron en un cromatógrafo líquido de alta resolución HPLC 1290 Infinity II (Agilent Technologies, Waldbronn, Alemania) acoplado a un espectrómetro de masas (G6410A Triple Quadrupole LC-MS) equipado con una fuente de ionización por electrospray (ESI) operada en modo de ionización positiva.

Las temperaturas del automuestreador y del horno de la columna se ajustaron a 25 °C. Los datos se adquirieron con el software MassHunter® Workstation Qualitative Analysis B.04.00 (Agilent Technologies). La optimización de la detección MS/MS se realizó parcialmente de forma automática y parcialmente de forma manual. Compre polvo de 4-CMC en línea de forma discreta, compre polvo de 4-CMC en línea en el Reino Unido, compre polvo de 4-CMC en línea en Alemania, compre polvo de 4-CMC en línea sin receta.

Los parámetros de espectrometría de masas se optimizaron ajustando el voltaje del cono y la energía de colisión. Los parámetros de espectrometría de masas para la detección de 4-CMC y sus metabolitos de fase 1 se resumen en la Tabla 1. La velocidad de escaneo (tiempo de permanencia) fue de 0,93 s. Las condiciones de ESI se optimizaron de la siguiente manera: voltaje capilar 3500 V, temperatura de la fuente 300 °C, caudal de gas del cono 10 L/min, caudal de gas de desolvatación 12 L/min. Compre polvo de 4-CMC en línea con entrega rápida, compre polvo de 4-CMC en línea sin receta, solicite polvo de 4-CMC en Bélgica.

Muestras humanas:

Se obtuvieron muestras de fluido oral (FO), sudor y orina de un estudio observacional-naturalista. El estudio se realizó con 8 voluntarios (6 mujeres y 2 hombres, con una edad media de 36 años (rango de 30 a 54) y un peso medio de 64,55 kg (rango de 46 a 87,0 kg) en el Hospital Universitari German Trias i Pujol, Institut d’Investigatiò en Ciènces de la Salut Germans Trias i Pujol, en Badalona, ​​España.

La sesión de observación tuvo lugar en un club privado con música ambiental. La temperatura ambiente en el club era de aproximadamente 24 °C. Las sesiones comenzaron a las 15:00 y finalizaron a las 21:00. Todas las dosis fueron autoadministradas y seleccionadas por cada participante, presumiblemente en función de su experiencia previa. Países Bajos, comprar polvo de 4-CMC en Canadá, comprar polvo de 4-CMC sin receta.

Las muestras de la sustancia fueron analizadas por Energy Control (https://energycontrol.org/), una organización de reducción de daños que ofrece un servicio de análisis de drogas para usuarios. Todos los participantes tenían experiencia recreativa con drogas de abuso comunes (psicoestimulantes como cocaína, anfetaminas, 3,4-metilendioximetanfetamina (MDMA) y catinonas sintéticas).

Antes de las sesiones del estudio, los participantes se sometieron a un examen médico general que incluyó un análisis rápido de orina para detectar drogas y declararon no haber consumido catinonas en las últimas semanas.

Se recopilaron medidas de los efectos farmacológicos (no se presentan en este manuscrito). El ensayo clínico fue aprobado por el comité local de ética de investigación en humanos (CEI-HUGTiP ref. PI-19–082). ¿Puedo comprar polvo de 4-CMC en línea? ¿Puedo pedir polvo de 4-CMC en línea en Italia? Polvo de 4-CMC barato.

Se llevó a cabo de acuerdo con las recomendaciones de la Declaración de Helsinki y la normativa española sobre investigación clínica. Todos los participantes fueron… Se informó a los participantes, tanto verbalmente como por escrito, y se firmó un consentimiento informado antes de su inclusión en el estudio. Recibieron una compensación económica por su participación. ¿Puedo comprar polvo de 4-CMC en línea? ¿Puedo pedir polvo de 4-CMC en línea en Italia? ¿Puedo conseguir polvo de 4-CMC barato?

Las cápsulas contenían 100 mg (en el caso de 3 mujeres y 1 hombre) o, alternativamente, 150 mg (en el caso de 3 mujeres y 1 hombre) de 4-CMC, que fueron autoadministradas. Se recogieron muestras de líquido oral en tubos de plástico Salivette® antes de la administración (pre-dosis) y a las 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4 y 5 horas después de la administración. Las muestras se centrifugaron inmediatamente y se almacenaron a -20 °C hasta su análisis.

Preparación de la muestra:

Líquido oral y orina:
Diez μL del estándar interno de 100 ng/ml (N-etilpentedrona) y 5 ml de líquido oral. Se añadió una mezcla de cloroformo y acetato de etilo 9:1 (v/v) a 100 μL de muestra biológica, como líquido oral o orina. Los tubos de muestra se agitaron durante 5 minutos y se centrifugaron a 6000 rpm durante 12 minutos.

La fase orgánica se transfirió a tubos limpios, se añadieron 100 μL de metanol ácido (HCl al 1 %) para evitar pérdidas por evaporación mientras las muestras se secaban bajo nitrógeno durante aproximadamente 30 minutos. Las muestras secas se reconstituyeron en 100 μL de metanol y se transfirieron a viales para automuestreador antes de inyectar 5 μL. Sistema cromatográfico.

Estudio de estabilidad de 4-CMC en sangre, fluido oral y orina:
Se realizaron dos series de experimentos para examinar la estabilidad de 4-CMC en sangre humana, fluido oral y orina. En la primera serie, se colocaron 0,5 ml de sangre total, fluido oral u orina en tubos de plástico de 10 ml. Se prepararon 10 muestras de cada matriz y se les añadieron 50 ng de 4-CMC y 50 ng de N-etilpentedrona (estándar interno) cada una.

Los tubos se taparon y 5 de cada matriz se mantuvieron a temperatura ambiente (23 °C) y 5 en el congelador a -20 °C. El primer tratamiento de la muestra y el análisis por HPLC-MS/MS se realizaron inmediatamente después de añadir el analito a las matrices. Los siguientes análisis de las muestras de sangre se realizaron a las 1, 3, 12, 25, 29 y 33 horas después de la adición del analito. 1, 5 y 15 días después de la adición de analitos a muestras de líquido oral y orina.

En otro conjunto de experimentos de estabilidad, se dispensaron 5 ml de líquido oral o orina en dos tubos de vidrio diferentes de 10 ml (2 × 3 tubos en total). Cada matriz se enriqueció con 4-CMC y N-etilpentedrona (como estándar interno) a una concentración de 100 ng/ml. Los tubos se taparon y tres de ellos (uno de cada matriz) se mantuvieron a temperatura ambiente (23 °C), mientras que los otros tres se colocaron en el congelador (-20 °C).

Inmediatamente después de la adición de analitos, los tubos se agitaron manualmente y se extrajeron 2 × 0,2 ml de matriz de cada tubo. Las muestras se prepararon por separado (dos muestras de cada matriz a cada temperatura y en el punto temporal indicado) y se analizaron mediante HPLC-MS/MS (cada muestra se inyectó dos veces). Fabricante de polvo de 4-CMC, productores legítimos de polvo de 4-CMC, obtenga un proveedor legítimo de polvo de 4-CMC

En experimentos separados, se utilizó agua desionizada como matriz en lugar de los fluidos biológicos mencionados anteriormente. Además, en un conjunto de muestras, el estándar interno se añadió no desde el inicio, sino justo después de la incubación de 4-CMC e inmediatamente antes de la preparación de la muestra para el análisis HPLC-MS/MS. Este último experimento se realizó para examinar la estabilidad del estándar interno en las matrices estudiadas.Clefedro (4-CMC).

Resultados y discusión:
Identificación de metabolitos de fase 1 de 4-CMC:
Como se mencionó anteriormente, varios estudios informaron la presencia de algunos metabolitos de 4-CMC en incubaciones con microsomas hepáticos humanos [13], en muestras de casos forenses [2] o de estudios clínicos controlados [14]. Sin embargo, aún no se ha publicado una identificación exhaustiva de todos los posibles metabolitos de fase 1 en muestras humanas.

En la parte analítica que abarca casos forenses [2], la atención se centró en el dihidrometabolito de 4-CMC (Hidroxi-4-CMC; Metabolito 2 en la Fig. 1), propuesto como un biomarcador fiable del consumo de 4-CMC, mientras que otros metabolitos potenciales no fueron investigados. Cómo comprar polvo de 4-CMC en línea, fabricante legítimo de polvo de 4-CMC, productores legítimos de polvo de 4-CMC, proveedor legítimo de polvo de 4-CMC.

En el informe publicado recientemente sobre un estudio clínico controlado [14], además del dihidrometabolito mencionado anteriormente y su producto de N-desmetilación (Hidroxi-nor-4-CMC) (metabolito 5), se detectó el producto de N-desmetilación de 4-CMC intacto junto con sus metabolitos de fase 2 (glucurónidos). Además de estos 3 metabolitos de fase 1, se informó sobre el derivado hidroximetílico en el centro quiral en incubaciones de microsomas hepáticos humanos en la referencia [14]. 13 (Metabolito 3 en la Fig. 1).Clefedro (4-CMC).

La identificación de posibles metabolitos de la fase 1 de 4-CMC en el líquido oral y la orina de uno de los voluntarios participantes en este estudio condujo a la detección de los metabolitos mostrados en la Fig. 1. De esta forma, se identificaron tres metabolitos adicionales: el metabolito 3, el metabolito 6 y el metabolito 7. De estos metabolitos, los metabolitos 1 a 3 parecen ser los principales, mientras que los metabolitos 4, 5, 6 y 7 se detectaron en cantidades menores o no se detectaron en absoluto en la muestra de líquido oral estudiada. De todos los compuestos mostrados en la Fig. 1, solo se disponía comercialmente de estándares para el metabolito 1 (que en realidad es 4-clorocatinona) y el metabolito 5.

Lamentablemente, no contábamos con estos estándares al inicio del proyecto. Por lo tanto, este método preliminar enantioselectivo para el análisis de 4-CMC y sus metabolitos se desarrolló utilizando muestras biológicas reales, y solo se disponía de un estándar para el compuesto nativo, 4-CMC.

3.2. Desarrollo de un método enantioselectivo HPLC-MS/MS para la separación de 4-CMC y sus metabolitos de fase 1
De los 8 compuestos representados en la Figura 1, 5 contienen un centro quiral y 3 contienen dos centros quiral. Por lo tanto, si se formaran todos los metabolitos en todas las configuraciones estereoquímicas posibles, se esperarían 22 especies individuales (excluyendo cualquier metabolito de fase 2). En consecuencia, una muestra de este tipo es bastante compleja y su análisis completo y exitoso representa un desafío considerable.Clefedro (4-CMC).

Como se mencionó anteriormente, Schmid y colaboradores informaron sobre la separación de los enantiómeros de 4-CMC mediante electroforesis capilar y cromatografía de gases (tras derivatización con un reactivo quiral) [4]. En 2021, Spalovska et al. publicaron la separación por HPLC de los enantiómeros de 4-CMC con fases móviles de tipo alcano-alcohol [15]. En el mismo estudio, se informó sobre la separación enantiomérica de uno de los metabolitos de fase 1 de 4-CMC, concretamente la 4-clorocatinona (o 4-cloronormetcatinona) (metabolito 1 en la figura 1).

Los autores también aislaron los enantiómeros de 4-CMC y, basándose en espectroscopia de dicroísmo circular electrónico y vibracional y cálculos de teoría del funcional de la densidad, asignaron la configuración estereoquímica absoluta para el primer y segundo pico cromatográfico eluido de la(s) columna(s) a base de tris(3,5-dimetilfenilcarbamato) de amilosa en la fase móvil utilizada como (S)-4-CMC antes que (R)-4-CMC [15]. Las fases móviles a base de alcano-alcohol utilizadas en la referencia 15 no son seguras para su uso en análisis de HPLC-MS debido a su alta inflamabilidad.

Por lo tanto, en el presente estudio, las columnas quirales descritas en la subsección 2.2 se evaluaron inicialmente con fases móviles compatibles con la detección por espectrometría de masas para la separación de los enantiómeros de 4-CMC. Se obtuvo una separación completa de estos enantiómeros en dos columnas: Lux i-Amilosa-3 (Fig. 2a y c) y Lux AMP (Fig. 2b y d).

En ambas columnas, el orden de elución de los enantiómeros fue (R)- antes que (S)-4-CMC en la fase móvil con tampón de bicarbonato a pH=11,0 y (S)- antes que (R)-4-CMC en la fase móvil con acetato de amonio, respectivamente. Por lo tanto, en ambas columnas se observó una inversión del orden de elución de los enantiómeros en las fases móviles especificadas.Clefedro (4-CMC).

Estabilidad de la CMC en sangre, líquido oral y orina humanos:

La inestabilidad de las catinonas sintéticas, y específicamente de la 4-CMC, es bien conocida [2], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [15]. Recientemente, Romanczuk et al. destacaron los problemas de interpretación asociados a la inestabilidad de los derivados de la catinona en sangre [23]. Para abordar este problema en toxicología clínica y análisis forense, algunos autores recomendaron el uso de su dihidrometabolito (metabolito 2) como indicador biológico del consumo de 4-CMC [2], [23].

Alternativamente, se recomendó la conversión de la 4-CMC y su normetabolito (4-clorocatinona) en hidrocloruros para mejorar su estabilidad tras la toma de muestras [15]. En las primeras etapas de este proyecto, observamos la ausencia de 4-CMC en el líquido oral (LO) entre 0 y 1 hora (en algunos casos, incluso después de 1,5 horas) tras su administración, su rápida desaparición de la sangre y su persistencia relativamente prolongada en el LO y la orina.

Basándonos en estas observaciones, decidimos dedicar parte del estudio a la estabilidad del 4-CMC en sangre, LO y orina. Se realizaron diversos experimentos de estabilidad, obteniéndose resultados más consistentes con la configuración experimental descrita en la Sección 2.6.Clefedro (4-CMC).

La concentración inicial de las muestras en las tres matrices estudiadas fue de 100 ng/ml. Un conjunto de muestras se conservó en un congelador a -20 °C y el otro a temperatura ambiente (23 °C). La señal de 4-CMC desapareció de la muestra de sangre conservada a 23 °C en 33 horas (Fig. 4a). Proveedor legítimo de polvo de 4-CMC en Roma, compre polvo de 4-CMC en línea en Noruega, Italia y España.Clefedro (4-CMC).

Según el límite de detección de nuestro método y la concentración inicial de 4-CMC en las muestras de estabilidad, su vida media en muestras de sangre total parece ser de aproximadamente 8 horas a 23 °C. La vida media de 4-CMC en condiciones fisiológicas podría ser significativamente más corta. Compre oxicodona en línea, adquiera oxicodona en nuestra farmacia en línea, compre polvo de 4-CMC puro en línea en España y Europa.

Esto significa que, siempre que sea posible, las muestras de sangre deben congelarse inmediatamente después de la toma. De lo contrario, los datos generados para la identificación o cuantificación de 4-CMC en muestras de sangre solo deben utilizarse con reservas en estudios clínico-toxicológicos o forenses (o no utilizarse en absoluto). El 4-CMC fue más estable en fluido oral y orina, aunque también se observó una degradación significativa en estas matrices en pocos días.

La tasa de degradación del 4-CMC en agua dependió en gran medida del pH. La mayor estabilidad se observó a pH 3,0. Su estabilidad disminuyó a pH 6,5 y fue la más baja a pH 10,3 (datos no mostrados). El 4-CMC fue estable en metanol y bastante estable en ambas fases móviles utilizadas en el presente estudio (acetonitrilo:agua 97:3 (v/v) + 5 mM de acetato de amonio, y metanol:5 mM de bicarbonato de amonio (pH 11,0) 90:10 (v/v)).Clefedro (4-CMC).

La estabilidad de la 4-CMC en la fase móvil mencionada resulta bastante sorprendente, dada su baja estabilidad en agua en condiciones alcalinas. Para examinar el efecto de la albúmina sérica humana (HSA) sobre la posible adsorción/unión y transformación química de la 4-CMC, se sustituyó la sangre total por suero como matriz. Los resultados indican que la 4-CMC es más estable en suero que en sangre total (datos no mostrados).Clefedro (4-CMC).

Como era de esperar, las tasas de degradación de la 4-CMC en las muestras congeladas fueron significativamente menores en todas las matrices estudiadas en comparación con las muestras almacenadas a temperatura ambiente. Por ejemplo, en muestras de sangre con una concentración de 100 ng/ml de 4-CMC, almacenadas a -20 °C, la 4-CMC aún se podía detectar después de 150 horas, mientras que en el mismo tipo de muestra almacenada a temperatura ambiente, su concentración descendió por debajo del límite de detección después de aproximadamente 33 horas.

Estos estudios de estabilidad se presentan aquí para resaltar las dificultades que se presentan al intentar generar datos farmacocinéticos y metabólicos para la 4-CMC. Cabe destacar que los metabolitos 2 y 3 de la 4-CMC no pudieron detectarse mediante HPLC-MS/MS en ninguna de las matrices de interés en este estudio ni bajo ninguna condición de almacenamiento.

Por lo tanto, si estos dos metabolitos se detectan en el organismo, lo más probable es que no provengan de la degradación de la 4-CMC, mientras que la información sobre cualquier otro metabolito debe interpretarse con suma precaución.

Aplicación del método analítico al fluido oral:
Como se mencionó anteriormente, la 4-CMC es más estable en fluido oral y orina que en sangre total, plasma o suero. Por consiguiente, el uso de fluido oral y orina para el estudio de la farmacocinética y el metabolismo de la 4-CMC parece más fiable. La dependencia C-t de los niveles de 4-CMC en OF de 3 voluntarios se muestra en la Fig. 5.Clefedro (4-CMC).

Curiosamente, durante la primera hora tras su administración, el 4-CMC no se detecta en el líquido oral (Fig. 6a,b). Aparentemente, en la fase inicial de la administración, la dosis total de 4-CMC, absorbida en sangre, se transforma rápidamente. Dos horas después de la administración de 4-CMC, el fármaco intacto y los cuatro estereoisómeros del metabolito 2 son detectables en el líquido oral.Clefedro (4-CMC).

Para confirmar estos resultados, en la figura 7 se muestran los cromatogramas de la muestra de líquido oral cinco horas después de la administración del fármaco, tanto en la columna Lux i-Amylose-3 (Fig. 7a) como en la columna Lux AMP (Fig. 7b). Del estudio farmacocinético del 4-CMC en el líquido oral se pueden extraer las siguientes conclusiones importantes: 1) Durante la primera hora tras la ingestión, el 4-CMC no parece detectable en el líquido oral y, muy probablemente, tampoco en sangre.

Esta observación tiene una relevancia forense significativa y debe considerarse cuidadosamente. 2) El uso del dihidrometabolito de 4-CMC (metabolito 2) como biomarcador del consumo de 4-CMC puede ser aceptable, pero no del todo fiable, ya que en el intervalo de tiempo (periodo de inducción) en el que el 4-CMC no es detectable (0-1 h después de la administración), su metabolito 2 tampoco lo es, al menos con el método propuesto en el presente estudio. 4) De las dos opiniones bastante contradictorias sobre la estabilidad metabólica y la eliminación del 4-CMC publicadas recientemente [7], [14], quizás su metabolismo rápido [7] sea más plausible que su alta estabilidad metabólica y su baja eliminación [14]. 5) Según los resultados del presente estudio, el metabolismo y la farmacocinética del 4-CMC en el cuerpo humano no parecen ser enantioselectivos en un grado significativo.Clefedro (4-CMC).

Sin embargo, cabe destacar que nuestros experimentos preliminares sobre la estabilidad estereoquímica del 4-CMC mostraron que es extremadamente inestable desde el punto de vista estereoquímico. Por lo tanto, los resultados observados en el presente estudio pueden verse gravemente afectados por transformaciones/racemización posteriores al muestreo. Compre oxicodona en línea, adquiera oxicodona en nuestra farmacia en línea, compre polvo puro de 4-CMC en línea en España y Europa.

Aplicación del método a muestras de orina:

Se analizaron muestras de orina acumuladas, recogidas durante los periodos de 0 a 2 y de 2 a 5 horas tras la administración del fármaco, en el caso de dos voluntarios. Ambos voluntarios recibieron dosis únicas de 150 mg de 4-CMC. Los datos fueron cualitativamente similares en ambos casos, por lo que las muestras de orina de uno de los voluntarios se analizan con más detalle a continuación.Clefedro (4-CMC).

La concentración de 4-CMC fue menor en la muestra de orina acumulada recogida en el periodo de 0 a 2 horas en comparación con el periodo de 2 a 5 horas. Se observó una diferencia pequeña pero significativa en los niveles de concentración de los enantiómeros de 4-CMC. Esta diferencia se confirmó con dos columnas quirales que invirtieron el orden de elución de los enantiómeros de 4-CMC.

Sin embargo, los resultados observados son demasiado preliminares (considerando todos los desafíos mencionados) para extraer conclusiones sobre el metabolismo enantioselectivo de 4-CMC y su eliminación.

Conclusiones:

El bioanálisis de nuevas sustancias psicoactivas (NSP) presenta desafíos significativos debido a la ausencia de estándares relacionados, especialmente para los metabolitos de las NSP. Cuando las NSP son quirales, surgen desafíos adicionales debido a la ausencia de estándares enantioméricamente puros, así como al aumento significativo en el número de especies objetivo (enantiómeros y estereoisómeros) que deben separarse.Clefedro (4-CMC).

Si la NSP es una catinona sintética, la falta de estabilidad del compuesto original y sus metabolitos en matrices biológicas y disolventes utilizados para la preparación de muestras y la separación cromatográfica genera problemas adicionales. Es necesario considerar cuidadosamente todas estas cuestiones para desarrollar un método bioanalítico enantioselectivo fiable para el análisis simultáneo de una NPS (quiral) y sus metabolitos farmacológicamente relevantes en matrices biológicas.Clefedro (4-CMC).

Algunos de estos problemas se destacaron en el presente trabajo, tomando como ejemplo la 4-CMC, y en algunos casos se discuten posibles soluciones a estos desafíos. El método HPLC-MS/MS descrito en este estudio permite la determinación cuantitativa enantioselectiva simultánea de la 4-CMC y sus metabolitos de fase 1 en fluidos biológicos. Si se decide extender este estudio a los metabolitos de fase 2, entonces aparentemente se deben utilizar métodos aún más eficientes, como las técnicas de electromigración capilar acopladas a espectrometría de masas o la cromatografía bidimensional acoplada a espectrometría de masas.Clefedro (4-CMC)